高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn);進樣系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域。
高效液相色譜儀的特性：
高壓--壓力可達150~300kg/cm。色譜柱每米降壓為75kg/cm以上。
高速--流速為0.1~10.0mL/min。
高效--塔板數(shù)可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
高靈敏度--紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點:
速度快--通常分析一個樣品在15~30min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。
分辨率高--可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。
靈敏度高--紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達0.1pg。
色譜柱可反復(fù)使用--用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收--樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
